[發(fā)明專利]聯(lián)合型支原體檢測試劑及制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00113758.1
• 申請日: 2000-03-15
• 公開（公告）號: CN1095500C
• 公開（公告）日: 2002-12-04
• 發(fā)明（設計）人: 黃威權;姚兵
• 申請（專利權）人: 黃威權;姚兵
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12N1/20;G01N33/50
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳翠蘭

本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，特別涉及一種因支原體引起的泌尿生殖道疾病的檢測試劑及其制備方法。

支原體是性傳播性泌尿生殖道疾病的常見病原體。檢出率占性病人群的40～70％，支原體感染可導致尿生殖道炎、前列腺炎、盆腔炎、男性不育、女性不孕、絨毛膜炎和低出生體重兒等疾病。目前，國內(nèi)外對支原體實驗診斷技術的研究較多，如特異性抗體檢測技術、代謝抑制試驗、Southem?Blot、PCR法、培養(yǎng)法等(Taylor-Robinson?D.Clin?Lab?Sci，1989；9(30)：501-523.和Jensen?JS?et?al.J?ClinMicrobiol，1991；29(1)：46-50)。抗體檢測技術易出現(xiàn)交叉反應。代謝抑制試驗，需加特異性抗體抑制支原體的生長，臨床應用不多。SouthernBlot實驗技術要求較高，不易普遍開展。PCR法容易出現(xiàn)假陽性和假陰性，已被國家衛(wèi)生部下令禁止應用于臨床檢驗。而培養(yǎng)法是根據(jù)支原體的生活習性而采用的特異性選擇性培養(yǎng)基檢測支原體的方法，目前各醫(yī)院常用的培養(yǎng)基多為單一支原體培養(yǎng)基，如單一的解脲性支原體培養(yǎng)基、單一的人型支原體培養(yǎng)基。單一的支原體培養(yǎng)基國內(nèi)已有人申報了專利(申請?zhí)枺?6117201.0發(fā)明人：王荷英)。解脲型支原體國內(nèi)有一家單位申請到了批號(上海金橋公司)。但是聯(lián)合型支原體培養(yǎng)基未見有人申報專利，國內(nèi)外迄今也未見有批號問世。

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術的缺點，提出了能在一種試劑中同時檢出幾種支原體的試劑及制備方法，達到了降低成本、防止漏檢、節(jié)約患者開支和減少檢測工作量等目的，為支原體病的及時有效治療提供了保證。

聯(lián)合型支原體檢測試劑是一種液體培養(yǎng)基，其制備方法如下：

1、培養(yǎng)基：新鮮牛肉浸出液及豬胃或肺消化液的提取：

(1)、牛肉浸出液的提取：新鮮牛肉1～2斤絞碎后，加500～1000ml蒸餾水浸泡10～25小時，煮沸過濾取其濾液。

(2)、豬胃或肺消化液的提取：取新鮮豬胃或肺1～2斤，絞碎，加500～1000ml蒸餾水、0.3～2克蛋白酶，消化10～25小時，煮沸過濾，取其濾液。

2、基礎培養(yǎng)基的配制：

按下列比例將下列物質(zhì)混合：

牛肉浸出液????????????????300～600ml

豬胃或肺消化液????????????100～400ml

氯化鈉????????????????????3～5克

磷酸二氫鉀????????????????1～3克

蛋白胨????????????????????5～20克

待固體化學物質(zhì)完全溶解后，煮沸后過濾備用。

3、完全培養(yǎng)基的配制：

按下列比例將下列物質(zhì)混合：

基礎培養(yǎng)基????????????????500～900ml

新鮮小牛血清??????????????100～500ml

新鮮酵母液????????????????50～150ml

脲素??????????????????????0.5～2克

精氨酸????????????????????3～15克

酚紅??????????????????????50～150毫克

青霉素????????????????????50～150萬單位

完全培養(yǎng)基配制完成后，即為聯(lián)合型支原體檢測試劑。該試劑既有利于解脲型支原體生長，又有利于人型支原體生長。并含有為解脲型支原體分解利用為能源的尿素和為人型支原體分解為能量的精氨酸，尿素和精氨酸被分解后釋放出NH₄⁺，使試劑pH值升高，最終使培養(yǎng)基中的酚紅指示劑從黃色變成紅色。

本發(fā)明能高效地同時檢出人型支原體和解脲型支原體，與單一支原體檢測試劑比較，其特點是：性能穩(wěn)定，判斷標準直觀，特異性強，檢出率高，不需特殊設備，24小時即可報結果。本試劑已在6家綜合性醫(yī)院試用，觀察了5000多例病例，效果很好。為支原體感染病的及時有效治療提供了保證。