[發明專利]一種新的多肽——ZnT－1－22和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00111971.0
• 申請日: 2000-03-10
• 公開（公告）號: CN1313295A
• 公開（公告）日: 2001-09-19
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——ZnT-1-22，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

盡管鋅原子是許多金屬酶、轉錄因子和其它蛋白的必須組成，但是哺乳動物調節鋅原子的體內平衡機制和是不為人所知[Valee,B.L.andFalchuk,K.H.(1993)Ph?ysiol.Rev.,73,79-117]。在組織水平，哺乳動物的鋅原子初級調節位點是腸的吸收，它能在鋅缺乏是提高其含量而在鋅過多是降低其含量[Cousins,R.J.(1985)Physiol.Rev.,65,238-309]。然后，鋅原子結合在清蛋白上參加循環，被肝臟吸收后再重新參與其它器官的分布。在細胞水平，特異的載體可能負責吸收和分泌鋅，而且有額外的載體專門吸收細胞質細胞器內的鋅。這些載體的數量、活性和細胞內定位很可能在維持鋅的體內平衡起著重要作用[Gachot,B.,Tauc,M.,Wanstok,F.,M.,Richard,M.J.and?Favier,A.(1992)Biol.Trace?Element?s?Res.,32,213-225]。

ZnT-1就是一個這樣的鋅載體蛋白。ZnT-1基因包含有一個開放閱讀框，編碼一個507個氨基酸的蛋白，一個富含GC的5’非翻譯區和一個長的缺少poly(A)尾巴的3’非翻譯區[Richard?D.PalMiter?et?al.,(1995)EMBO?J.Feb15；14(4):639-649]。該蛋白有6個跨膜結構域，N末端和C末端都在膜內，在跨膜結構域Ⅳ和Ⅴ以及一個長的C末端尾巴之間有一個膜內富含組氨酸的環。通過免役實驗發現，ZnT-1定位于細胞質膜。將突變ZnT-1基因放至正常細胞中表達，發現表達出的蛋白缺乏第一個跨膜結構域，并使得一系列的細胞具有對鋅的敏感性。而去除前兩個跨膜結構域，則會導致ZnT-1全部功能的喪失；去除C末端尾巴，則會使細胞中毒。這表明ZnT-1是多聚體時功能才完全。突變細胞與正常細胞相比，有更高的穩定分子內鋅含量和表達不依賴于鋅的報告基因的能力。

鋅原子是許多金屬蛋白的金屬配基，而這些金屬蛋白又往往是一些真核調節基因轉錄的轉錄調控因子，調節很多基因的轉錄表達。真核基因的轉錄調控對于基因的正常表達及發揮生物學功能是十分重要的，轉錄調控因子在生物體內參與決定基因在何種組織及何種發育階段開始轉錄。鋅原子的含量能夠影響轉錄調控因子的活性，從而進一步影響基因的正常表達。

本發明人的多肽與ZnT-1在蛋白水平上有35％的相同性和53％的相似性，并具有與ZnT-1相似的特征片段。基于以上各點，故認為本發明的新基因為編碼ZnT-1基因相似的基因，命名為ZnT-1-22，并推測其具有相似的生物學功能。

由于如上所述ZnT-1-22蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的ZnT-1-22蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新ZnT-1-22蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——ZnT-1-22以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼ZnT-1-22的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼ZnT-1-22的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產ZnT-1-22的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——ZnT-1-22的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——ZnT-1-22的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與ZnT-1-22異常相關的疾病的方法。本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；