[發(fā)明專(zhuān)利]一種新的多肽——人TFIIS特征性序列片段的鋅指蛋白18和編碼這種多肽的多核苷酸

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00111467.0
• 申請(qǐng)日: 2000-01-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1307005A
• 公開(kāi)（公告）日: 2001-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海博道基因技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/435
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人含TFIIS特征性序列片段的鋅指蛋白18，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

在許多蛋白中均發(fā)現(xiàn)含有鋅原子結(jié)合結(jié)構(gòu)域，這些蛋白在生物體內(nèi)涉及蛋白與核酸、蛋白與蛋白間的相互作用。鋅結(jié)合蛋白通常作為轉(zhuǎn)錄因子及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子參與基因的表達(dá)與調(diào)控，這類(lèi)蛋白構(gòu)成了一個(gè)很大的蛋白家族，被稱(chēng)為鋅指蛋白。一個(gè)鋅原子結(jié)合結(jié)構(gòu)域通常由25到30個(gè)氨基酸殘基組成，這些氨基酸殘基組成了一個(gè)或多個(gè)原子結(jié)合位點(diǎn)。鋅原子的結(jié)合使蛋白折疊成一定結(jié)構(gòu)單位，這些結(jié)構(gòu)能很好的適應(yīng)大分子間的相互作用(Berg,J.M.et?al.,1996,Science,271:1081-1085)。研究發(fā)現(xiàn)，鋅指蛋白在不同的生物的各種組織中均有表達(dá)，這些組織包括造血細(xì)胞、腦、神經(jīng)系統(tǒng)、各種與腫瘤相關(guān)的組織和無(wú)限增殖細(xì)胞系組織等。其在這些組織的基因表達(dá)過(guò)程中均起著極為重要的作用。

鋅指蛋白及其結(jié)構(gòu)域根據(jù)其鋅原子結(jié)合的數(shù)目及位置的不同可分為不同的類(lèi)別。C2H2型鋅原子結(jié)合結(jié)構(gòu)域最早在蛋白轉(zhuǎn)錄因子ⅢA中被得到，是真核生物轉(zhuǎn)錄因子中分布最廣的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。C2H2型鋅指蛋白的蛋白序列中均含有下列保守的序列特征：(Tyr,Phe)-X-Cys-X(2,4)-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X(3,5)-His(其中X表示任意氨基酸殘基；半胱氨酸與組氨酸與鋅原子形成配位鍵，結(jié)合鋅原子；其它三個(gè)保守的氨基酸殘基形成疏水性中心區(qū)域；其它變化的氨基酸殘基負(fù)責(zé)介導(dǎo)蛋白與其它分子的相互作用)。一個(gè)鋅指蛋白可能含有一個(gè)或多個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域在生物體內(nèi)獨(dú)立完成自己的生理學(xué)功能。在很多情況下，含有鋅指結(jié)構(gòu)域的蛋白與特殊的雙鏈及單鏈DNA序列相互作用，起著轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的作用。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，C2H2類(lèi)型的鋅指結(jié)構(gòu)域不僅在一些組織的基因表達(dá)過(guò)程中起重要的調(diào)節(jié)作用，其在發(fā)育調(diào)節(jié)過(guò)程亦起著非常關(guān)鍵的作用。

轉(zhuǎn)錄因子S-Ⅱ(TFIIS)是一種真核蛋白，對(duì)于RNA多聚酶Ⅱ的轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)是必需的。該轉(zhuǎn)錄因子只有在RNA聚合酶Ⅱ存在時(shí)才顯示與DNA的結(jié)合活性。該蛋白約由300個(gè)氨基酸殘基組成，且其在哺乳動(dòng)物、果蠅、酵母中均高度保守。該轉(zhuǎn)錄因子家族的成員均含有一高度保守的區(qū)域，這一保守區(qū)域含有四個(gè)半胱氨酸殘基與鋅離子結(jié)合并折疊成一鋅帶狀結(jié)構(gòu)。除半胱氨酸外，這一保守區(qū)域還含有其它保守的氨基酸殘基，該保守區(qū)域由如下所示的一致性序列片段組成：C-X(2)-C-X(9)-[LIVMQSAR]-[QH]-[STQL]-[RA]-[SACR]-X-[DE]-[DET]-[PGSEA]-X(6)-C-X(2,5)-C-X(3)-[FW]；其中四個(gè)半胱氨酸殘基為鋅配鍵形成的位點(diǎn)。所有該蛋白家族的成員均含有這一保守的序列片段。該序列片段可能是蛋白與核苷酸序列結(jié)合的識(shí)別位點(diǎn)，其特殊位點(diǎn)的突變將導(dǎo)致蛋白不能正常的與DNA結(jié)合，從而影響相關(guān)基因在體內(nèi)的表達(dá)。該轉(zhuǎn)錄因子家族的成員在生物體內(nèi)調(diào)控著RNA聚合酶Ⅱ延伸復(fù)合物的轉(zhuǎn)錄活性，其調(diào)控著一些原癌基因及病毒的表達(dá)，包括人免疫缺陷型病毒HIV-1的表達(dá)[Qian?X,Jeon?C.et?al.,1993,Nature,365:277-279]。而蛋白在體內(nèi)的作用位點(diǎn)主要是其高度保守的序列片段，該序列片段在體內(nèi)通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白與DNA的結(jié)合，來(lái)調(diào)節(jié)RNA聚合酶Ⅱ的轉(zhuǎn)錄延伸。其表達(dá)異常將導(dǎo)致一些基因在體內(nèi)的異常增殖，其通常與生物體內(nèi)一些免疫缺陷型疾病、各種腫瘤及癌癥等疾病的發(fā)生相關(guān)。

本發(fā)明的新的人含TFIIS特征性序列片段的鋅指蛋白同時(shí)含有C2H2型鋅指蛋白的特征性序列片段及-TFIIS特征性序列片段。其在生物體內(nèi)各種組織中均有表達(dá)，而在一些腫瘤細(xì)胞中表達(dá)量較高。該蛋白的兩個(gè)主要組成成分在生物體內(nèi)協(xié)同作用以調(diào)控著一些原癌基因及病毒的表達(dá)，其表達(dá)異常通常與一些發(fā)育紊亂癥、免疫系統(tǒng)疾病及各種腫瘤等疾病的發(fā)生密切相關(guān)。該蛋白可用于診斷及治療一些發(fā)育紊亂性疾病及一些相關(guān)組織的腫瘤及免疫缺陷性疾病等。

由于如上所述人含TFIIS特征性序列片段的鋅指蛋白18蛋白在機(jī)體內(nèi)重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的人含TFIIS特征性序列片段的鋅指蛋白18蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人含TFIIS特征性序列片段的鋅指蛋白18蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。